以牛血清白蛋白為載體,采用活化酯法合成靈芝酸A的偶聯(lián)抗原作為免疫原,按照免疫程序接種試驗兔,獲得針對偶聯(lián)抗原的多克隆抗體。對多克隆抗體的效價及靶向進行分析后,構(gòu)建靈芝酸A的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定法。結(jié)果顯示:多克隆抗體中存在靶向偶聯(lián)抗原3 個區(qū)域的獨特型抗體,總效價為1∶78 125,其中抗靈芝酸A特異性抗體效價為1∶3 125。間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定法的靈芝酸A檢出限為0.3 μg/L,半數(shù)抑制濃度為4.0 μg/L,線性范圍在0.6~27.3 μg/L之間。樣品測定批間變異系數(shù)低于10%,樣品加標(biāo)回收率在82.9%~118.6%之間,對22 份靈芝粉劑產(chǎn)品的測定結(jié)果顯示不同品牌產(chǎn)品中靈芝酸A含量的差異極顯著,該法測定結(jié)果與高效液相色譜法的測定結(jié)果相比,相關(guān)系數(shù)為0.972。結(jié)果表明,間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法測定靈芝酸A可行,該方法能夠為靈芝保健品市場中相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)控提供一種輔助方案。
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