目的:考察枸杞中分離得到的綠原酸對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblasts,CFs)纖維化的干預(yù)效果。方法:質(zhì)量濃度10 ng/mL TGF-β1誘導(dǎo)CFs建立心肌纖維化細(xì)胞模型,用不同質(zhì)量濃度綠原酸處理纖維化細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)(cell counting kit-8,CCK-8)檢測(cè)綠原酸對(duì)CFs增殖的影響;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)纖維化標(biāo)志蛋白膠原蛋白(collagen,Col)I、Col III和免疫熒光檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表達(dá);實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)檢測(cè)Twist1、Acta2、Snail2及纖維化蛋白S100A4等mRNA表達(dá)水平;Western blot檢測(cè)TGF-β1/Smads信號(hào)通路相關(guān)蛋白及其磷酸化表達(dá)水平。結(jié)果:CCK-8檢測(cè)表明枸杞中分離得到的綠原酸能抑制細(xì)胞異常增殖;ELISA和免疫熒光檢測(cè)表明,枸杞中分離得到的綠原酸能下調(diào)纖維化標(biāo)志蛋白Col I、Col III和α-SMA的表達(dá);qPCR檢測(cè)表明枸杞中分離得到的綠原酸能高度顯著下調(diào)纖維化轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Acta2、Twist1、Snail1、Snail2、Smad4及纖維化蛋白S100A4的mRNA表達(dá)(P<0.001);Western blot檢測(cè)表明枸杞中分離得到的綠原酸能高度顯著下調(diào)TGF-β1/Smads信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)(P<0.001)。結(jié)論:在本研究質(zhì)量濃度范圍內(nèi),枸杞中分離得到的綠原酸抑制TGF-β1誘導(dǎo)的CFs纖維化過程,其機(jī)制可能與TGF-βl/Smads信號(hào)通路有關(guān)。
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