目的:通過基因干擾和過表達(dá)技術(shù),研究V-ATP酶H亞基(V-ATPase membrane subunit H,VMAH)蛋白在柑橘綠霉病菌指狀青霉生長中的生理功能,及其作為抗柑橘綠霉病藥物作用靶點(diǎn)的可行性。方法:采用菌絲生長法和孢子萌發(fā)法,研究沉默和過表達(dá)VMAH基因?qū)φ:兔{迫條件下指狀青霉細(xì)胞生長特性的影響。結(jié)果:在正常生長條件下,沉默VMAH基因顯著抑制了指狀青霉菌絲體的生長;而過表達(dá)VMAH基因?qū)w生長表現(xiàn)出顯著促進(jìn)作用。在不同pH值環(huán)境下,沉默VMAH基因顯著抑制了指狀青霉菌絲的生長,尤其在偏酸性(pH值低于2)和偏堿性(pH值高于8)條件下尤為顯著;而過表達(dá)VMAH基因在一定程度上促進(jìn)了菌體菌絲的生長,pH值為6時(shí),其促進(jìn)作用最顯著。與野生株相比,沉默VMAH基因?qū)Π釩a2+、Cu2+、Fe2+等金屬離子脅迫處理較為敏感。VMAH基因沉默菌株對(duì)質(zhì)子泵抑制劑類殺菌劑的敏感性顯著增加,尤其V-ATP酶專一性抑制劑巴佛洛霉素A1最為明顯;而VMAH基因過表達(dá)菌株對(duì)質(zhì)子泵抑制劑類殺菌劑的敏感性顯著降低。結(jié)論:VMAH在指狀青霉生長過程中發(fā)揮重要作用,是研發(fā)低耐藥性柑橘采后殺菌劑的潛在作用靶點(diǎn)。
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