研究制備了一種可同時快速定量檢測黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)和赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的二聯(lián)時間分辨熒光免疫層析試紙條。采用銪系時間分辨熒光微球分別標記AFB1和OTA單克隆抗體,優(yōu)化熒光微球活化pH值、標記的抗體濃度、熒光探針使用量、檢測線包被原濃度、質(zhì)控線羊抗鼠IgG濃度、樣品前處理條件等因素。結(jié)果表明:檢測AFB1和OTA的IC50分別為1.58、3.91 μg/kg,線性范圍分別為0.26~9.73、1.14~13.29 μg/kg,肉眼檢測限分別為3.70、5.55 μg/kg;與黃曲霉毒素類似物交叉率為12%~62%,與赭曲霉毒素B交叉率為58%,與其他真菌毒素?zé)o明顯交叉反應(yīng);選擇玉米樣品進行添加回收實驗,2 種毒素回收率在92%~103%之間,變異系數(shù)小于15%;對實際樣品的檢測與高效液相色譜法和市售膠體金試紙檢測結(jié)果一致;且該試紙條可在4 ℃穩(wěn)定保存5 個月以上,穩(wěn)定性較好。本研究所制備的時間分辨熒光免疫層析試紙條具有靈敏、準確、快速和簡便等特點,非常適用于玉米等食品和農(nóng)產(chǎn)品中AFB1和OTA的現(xiàn)場快速篩查。
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