采用研磨法破碎黑曲霉H1-9b 菌絲體,經(jīng)pH5.7 磷酸緩沖液抽提獲得粗酶液,粗酶液經(jīng)DEAE-Sepharose離子交換層析和Superdex-200 凝膠過濾層析,得到葡萄糖氧化酶純品。該酶的比活力為30569.7U/mg,回收率為30.2%,提純倍數(shù)為41.4 倍,分子質(zhì)量為94.1kD,為單亞基酶。該酶最適溫度為37℃,最適pH 值為5.7,在30~40℃溫度范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好,在pH4.0~8.0 范圍內(nèi)活性穩(wěn)定。以不同濃度葡萄糖為底物在最適條件下測得該酶Km 值為30.69mmol/L,Vmax 為21.88μmol/L。Ag+、Cu2+、Zn2+ 對該酶活性有較大抑制作用。結(jié)果表明,該酶穩(wěn)定性較好,有一定的應(yīng)用價值。
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