領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
探索特異性水解αs1-酪蛋白作用表位的蛋白酶篩選方法。首先通過固相合成法合成αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105，純化鑒定后，偶聯(lián)牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）制備完全抗原，然后免疫BALB/c小鼠，制備單克隆抗體，進而建立間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定方法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），以αs1-酪蛋白制備的單克隆抗體及建立的方法為對照。結(jié)果表明：合成作用表位的純度在90%以上，與BSA偶聯(lián)比為6.31。單克隆抗體的亞型為IgG1，效價可達到1∶320 000，可以與αs1-酪蛋白發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，與大豆蛋白無交叉反應(yīng)。建立的間接競爭ELISA，競爭抑制曲線回歸方程為y=－9.22x＋100.78（R2=0.989 1），方法重復(fù)性、精確性均較好，檢出限低于αs1-酪蛋白單克隆抗體建立的方法，初步篩選到木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶水解液的抗原殘留量較小，需要進一步通過體內(nèi)實驗驗證結(jié)果。αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105 G1型單克隆抗體制備成功，為新型αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105低致敏配方粉的開發(fā)，提供了ELISA檢測高靈敏專用單克隆工具抗體。
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