為建立生物合成牛乳鐵素的方法,根據(jù)牛乳鐵素氨基酸序列確定其編碼序列,利用PCR 技術(shù)獲得基因擴增產(chǎn)物,接著將該產(chǎn)物與編碼魚腥藍細菌Anabaena sp. PCC 7120 的DNA 聚合酶基因dnaENI 中斷裂的內(nèi)含肽基因Asp dnaEIn 的PCR 產(chǎn)物進行重組PCR,將獲得的重組融合基因再克隆到表達載體pET-28a 構(gòu)建重組融合表達質(zhì)粒。結(jié)果顯示,融合表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌后經(jīng)誘導(dǎo)能在大腸桿菌表達宿主Escherichia.coli BL21(DE3) 中大量表達,且細胞裂解液與純化的Anabaena sp. PCC 7120中含斷裂內(nèi)含肽Asp DnaEIc的DNA聚合酶蛋白DnaECI混合反應(yīng)后對金黃色葡萄球菌具有抑制作用。
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