利用RT-PCR 方法從馬鈴薯(Solanum tuberosum)莖段總RNA 中擴增、克隆amyA1 基因(NCBI 登錄號GQ406048.1)。采用半定量RT-PCR 方法檢測amyA1 基因在馬鈴薯莖、葉等不同組織中的表達強度,表明在莖組織中的表達豐度略高。利用生物信息學軟件分析amyA1 密碼子的偏好性;同時對AmyA1 氨基酸的理化性質(zhì)、細胞內(nèi)定位、保守結(jié)構(gòu)及高級結(jié)構(gòu)進行預測。基于NCBI 數(shù)據(jù)庫中有物種代表性的29 種α - 淀粉酶基因序列構(gòu)建了基因進化樹。amyA1 基因全長1224bp,可編碼一條理論分子質(zhì)量為46.40kD、407 個氨基酸殘基組成的、可能為親水性的胞外酶。與NCBI已登記的馬鈴薯α - 淀粉酶基因(登錄號M79328.1)核苷酸及氨基酸序列同源性達98%。第20~348 位點范圍內(nèi)的氨基酸殘基含有與淀粉酶13 家族及亞家族相似的催化活性域(PF00128、SM00624),第349~407位點范圍內(nèi)的氨基酸殘基含有α - 淀粉酶C- 末端β折疊區(qū)域(PF07821)。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預測表明氨基酸殘基序列有維持淀粉酶活性的(β /α) 8 桶狀結(jié)構(gòu)以及其他幾個功能域結(jié)構(gòu)。所構(gòu)建的基因進化樹表明,兩個馬鈴薯α - 淀粉酶基因與木薯、蘋果的序列同源性較高,與菜豆的次之,與水稻、大麥、玉米等單子葉植物的序列同源性較低。
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