目的:研究耐熱纖維素酶基因工程菌的規(guī)模化生產(chǎn)。方法:采用二次回歸正交組合設(shè)計試驗對內(nèi)切纖維素酶重組菌的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,利用綜合相關(guān)系數(shù)分析法分析因素影響程度以及相對重要性。測定菌體生長的生物量、內(nèi)切纖維素酶活性。結(jié)果: 影響因素與纖維素酶活性間的二次回歸方程為:Y2=45.858-1.653Z1-1.258Z2Z3-2.012Z12-1.499Z22-1.415Z32-1.719Z42,方差分析具有顯著性。內(nèi)切纖維素酶重組菌產(chǎn)酶的最佳發(fā)酵條件為:添加15.9g/L 乳糖、10g/L麩皮、15g/L硫酸銨、5g/L玉米漿、1.0g/L碳酸鈣;理論產(chǎn)酶量最好為46.5357U/mL;在誘導(dǎo)時間約為4h,實際實驗酶產(chǎn)量達(dá)70.78U/mL。綜合相關(guān)系數(shù)分析表明:4個影響因素的重要性依次為:誘導(dǎo)劑X1(乳糖)>氮源X3(硫酸銨和玉米漿)>鈣質(zhì)量濃度X4(碳酸鈣)>碳源X2(麩皮),相互間通過交互對纖維素酶活性的間接影響都非常大,直接影響作用較小。 結(jié)論:通過使用綜合相關(guān)系數(shù)分析與二次回歸正交組合分析,兩者結(jié)合使用有互補(bǔ)性,能夠較好地指導(dǎo)耐熱纖維素酶基因工程菌發(fā)酵條件的優(yōu)化。
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