為認(rèn)識和應(yīng)用極端嗜熱細(xì)菌騰沖嗜熱厭氧桿菌(T. tengcongensis MB4T)產(chǎn)生的葡聚糖磷酸化酶(Tte-GlgP)的性質(zhì),用電噴霧質(zhì)譜法(ESI-MS)測定Tte-GlgP 的底物譜。結(jié)果表明:純化后的Tte-GlgP 有較廣的底物范圍,能將可溶性淀粉、麥芽糊精、糖原、麥芽七糖、麥芽五糖和麥芽三糖底物轉(zhuǎn)化為1- 磷酸葡萄糖(G-1-P)。用改進(jìn)后的雙酶法測定Tte-GlgP 對上述底物的轉(zhuǎn)化效率,以產(chǎn)生的G-1-P 的量為指標(biāo)(μmol/L),在相同的實(shí)驗(yàn)條件下,以麥芽七糖和麥芽五糖為底物時(shí),轉(zhuǎn)化效率相對高,分別為86.83μmol/L 和85.79μmol/L;糊精和可溶性淀粉次之,分別為82.9μmol/L G-1-P 和69.68μmol/L G-1-P;最低的分別為糖原和麥芽三糖,產(chǎn)生的G-1-P 分別為45.81μmol/L 和43.60μmol/L。兩種分析方法均證明麥芽寡糖、麥芽糖糊精和淀粉為Tte-GlgP 的最適底物。以上述雙酶法為酶活性測定方法,測得在體系pH8.0 時(shí),Tte-GlgP 的活性最高;在最適pH 值條件下以可溶性淀粉為底物時(shí)Tte-GlgP 催化反應(yīng)的最適溫度為60℃;在60℃保溫6h 后,Tte-GlgP 仍然有90% 的活性殘留,說明Tte-GlgP 具有熱穩(wěn)定性。
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