領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：為滿足腸道集聚性大腸埃希氏菌準(zhǔn)確檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和能力驗(yàn)證需求，研制具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)且具有全基因組測(cè)序信息的均勻穩(wěn)定的腸道集聚性大腸埃希氏菌菌體及gDNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。方法：利用二代高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)腸道集聚性大腸埃希氏菌（CMCC 44841）進(jìn)行全基因組測(cè)序，明確CMCC 44841的種屬、血清分型、多位點(diǎn)序列分型和毒力基因。對(duì)CMCC 44841進(jìn)行astA、aggR、pic特征性基因聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）確認(rèn)。采用冷凍干燥技術(shù)制備含量為103 CFU/樣品的菌球和含量為20 ng/樣品的gDNA小球。參照CNAS-GL017對(duì)20 個(gè)菌球樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)，采用單因素方差分析對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。將樣品分別于－20、4、25 ℃和37 ℃條件下保藏，對(duì)其貯藏穩(wěn)定性和運(yùn)輸穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。組織3 家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行協(xié)同標(biāo)定和驗(yàn)證。使用5 種不同基質(zhì)的即食食品樣本，按照國(guó)標(biāo)法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的適用性。結(jié)果：利用生物信息學(xué)分析，CMCC44841基因組大小為5.057 285 Mb，GC含量為50.6%，編碼區(qū)基因5 173 個(gè)。種屬鑒定結(jié)果為大腸埃希氏菌（Escherichia coli），血清預(yù)測(cè)結(jié)果為O127:H21，MLST為ST40型，攜帶除aggR、astA、pic之外其他相關(guān)的毒力基因。PCR擴(kuò)增出astA、aggR、pic片段大小分別為102、400 bp和1 111 bp。菌體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性檢驗(yàn)結(jié)果F=1.59，符合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的要求。菌體和gDNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品于－20 ℃和4 ℃保藏60 d，25 ℃保藏7 d，37 ℃保藏5 d后仍然穩(wěn)定。經(jīng)3 家實(shí)驗(yàn)室協(xié)同標(biāo)定，菌體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品含量均為103 CFU/樣品。20 件不同基質(zhì)的食品樣品加入腸道集聚性大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行檢驗(yàn)，均可以檢出。結(jié)論：本研究所制備的腸道集聚性大腸埃希氏菌菌體及gDNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)所用菌株來(lái)源于我國(guó)國(guó)內(nèi)分離菌株，且具有明確的全基因組序列信息，均勻性和穩(wěn)定性均符合要求，適用性良好，能夠滿足食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制和能力驗(yàn)證的需求。
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