將重組酶聚合酶等溫擴增(recombinase polymerase amplification,RPA)與免疫層析試紙條(lateral flow strip,LF)相結(jié)合,建立一種阪崎克羅諾桿菌快速檢測方法(RPA-LF)。將引物分別用生物素和地高辛修飾后進行RPA,產(chǎn)生生物素和地高辛標記的雙鏈DNA產(chǎn)物,擴增產(chǎn)物與膠體金標記的地高辛抗體及試紙條上固定的鏈霉親和素發(fā)生特異性結(jié)合,最終在試紙條上呈現(xiàn)肉眼可見的結(jié)果。靈敏度分析結(jié)果顯示,該方法對純培養(yǎng)目標菌的檢測限為1.7×102 CFU/mL,特異性分析結(jié)果顯示RPA-LF方法與其他常見病原菌無交叉反應(yīng)。利用人工污染的食物樣品評估RPA-LF檢測效果,結(jié)果顯示不同樣品增菌4 h或6 h后,檢測限達到1.7×100 CFU/g。利用20 種實際樣品作為檢測對象、利用國標方法作為對照,評估方法的檢測效果,結(jié)果顯示本研究所建立的方法與國家標準檢測方法獲得一致的檢測結(jié)果。
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