對藍圓鲹(Decapterus maruadsi)骨骼肌采用熱處理、硫酸銨分級沉淀、DEAE-Sepharose弱陰離子交換柱層析、Sephacryl S-200 HR凝膠過濾層析和HiTrap Q HP強陰離子交換柱層析相結(jié)合方法,分離、純化出一種內(nèi)源性脯氨酸內(nèi)肽酶抑制劑(prolyl endopeptidase inhibitor,PEPI)。研究了PEPI對脯氨酸內(nèi)肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)活性的影響及抑制機理。Tricine-十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳分析表明純化的PEPI分子質(zhì)量約為10 kDa,具有較強的熱穩(wěn)定性和酸堿耐受性,其為絲氨酸蛋白酶類PEP的專一性、可逆競爭型抑制劑,抑制常數(shù)Ki為0.34 μmol/L。PEPI與PEP形成復(fù)合物后,α-螺旋、無規(guī)卷曲比例增加,β-折疊比例減少,PEP活性中心構(gòu)象的改變是酶活力被抑制的主要原因。
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