為探究超高壓加速梨汁褐變的機(jī)制,以鮮榨翠冠梨汁為原料,采用超高壓(500?MPa、5?min)處理,以未處理的梨汁為對(duì)照,測(cè)定超高壓處理對(duì)梨汁貨架期色澤的影響,檢測(cè)處理前后梨汁中溶解氧質(zhì)量濃度和總酚濃度,并研究多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的最適pH值、最適反應(yīng)溫度、熱穩(wěn)定性、米氏常數(shù)(Km)。結(jié)果表明,超高壓組梨汁貨架期6 h褐變(色差值(ΔE)=1.61),而未處理組貨架期24?h仍未見明顯褐變(ΔE=0.56)。鮮榨梨汁PPO存在PPO1(pH?5.0)和PPO2(pH?7.0)兩種形式,超高壓加速褐變與PPO1和PPO2被激活有關(guān):PPO1活力從6.5?U/mL上升到14.1?U/mL,上升了1.17?倍;PPO2活力從2.6?U/mL上升到25.5?U/mL,上升了8.8?倍。激活效應(yīng)的內(nèi)在原因是PPO存在潛在酶活性形式,其本身活力較弱甚至無活力,超高壓是激活PPO潛在酶活性的外在原因之一,十二烷基硫酸鈉處理、熱處理等也可激活PPO潛在酶活性。超高壓降低PPO的Km值,提高了其與底物之間的親和力,從而提高酶促反應(yīng)速率;PPO1與底物的親和力1/Km從2.353?L/mol上升到46.909?L/mol,上升了18.9?倍;PPO2與底物的親和力從2.852?L/mol上升到62.857?L/mol,上升了21.0?倍。超高壓同時(shí)會(huì)降低最大酶促反應(yīng)速率(Vmax),Vmax對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響如超過Km的影響,將會(huì)表現(xiàn)出鈍化效應(yīng)。綜上,超高壓通過激活PPO潛在酶活力、提高PPO與底物的親和力和酶促反應(yīng)速率,加速鮮榨梨汁褐變。
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