利用黑曲霉自身強(qiáng)啟動(dòng)子(葡萄糖淀粉酶啟動(dòng)子,PglaA)實(shí)現(xiàn)了酸性果膠裂解酶PelD在黑曲霉中的過(guò)量表達(dá),重組酸性果膠裂解酶經(jīng)鎳柱親和層析純化后進(jìn)行Western blot鑒定及酶學(xué)性質(zhì)研究。重組酸性果膠裂解酶在搖瓶發(fā)酵條件下最高酶活力達(dá)到8?822.6?U/mL;經(jīng)一步純化后,該重組酶的比活力為8?522.7?U/mg,回收率為79.4%;該重組酶的最適反應(yīng)pH值為5.0,在pH?3.0~6.5范圍內(nèi)40?℃保溫2?h仍能保持50%以上的相對(duì)酶活力,在酸性pH值下穩(wěn)定性良好;最適反應(yīng)溫度為50?℃,該重組酶在30~50?℃的范圍內(nèi)非常穩(wěn)定;在1?mmol/L濃度下,Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Ni2+、Mn2+、Ba2+對(duì)該重組酶具有激活作用,其中Zn2+、Ni2+、Ba2+激活作用較為顯著,而十二烷基硫酸鈉表現(xiàn)為抑制作用;底物特異性分析表明該酶能夠特異性地降解高度甲酯化果膠,其對(duì)柑橘果膠(酯化度≥85%)酶活力高達(dá)31?248.0?U/mL;此外,重組酶對(duì)橙汁、蘋(píng)果汁和葡萄汁具有良好的澄清效果,其中橙汁的透光度提高了16.9?倍,蘋(píng)果汁的透光度提高了10.5?倍,葡萄汁的透光度提高了4.7?倍。
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