以羊背最長肌中肌聯(lián)蛋白為原料,添加蛋白激酶A和堿性磷酸酶體外孵育使肌聯(lián)蛋白發(fā)生磷酸化和去磷酸化反應(yīng)。反應(yīng)后添加μ-鈣蛋白酶,在鈣離子濃度分別為0.05 mmol/L和2 mmol/L條件下,4 ℃孵育2 d。測定孵育體系pH值、肌聯(lián)蛋白磷酸化水平及其降解程度。結(jié)果表明:不同處理組孵育體系pH值差異不顯著(P>0.05);蛋白激酶A組肌聯(lián)蛋白磷酸化水平顯著高于對照組,對照組肌聯(lián)蛋白磷酸化水平顯著高于堿性磷酸酶組(P<0.05);當(dāng)鈣離子濃度為0.05 mmol/L時(shí),蛋白激酶A組和對照組未檢測到分子質(zhì)量為1 200 kDa的降解條帶,而堿性磷酸酶組在孵育12 h檢測到該條帶;當(dāng)鈣離子濃度為2 mmol/L時(shí),蛋白激酶A組和對照組均在孵育12 h檢測到1 200 kDa降解條帶,而堿性磷酸酶組在孵育0.5 h時(shí)檢測到該條帶。結(jié)論:蛋白激酶A和堿性磷酸酶能夠促進(jìn)肌聯(lián)蛋白發(fā)生磷酸化和去磷酸化反應(yīng);隨著鈣離子濃度增加,肌聯(lián)蛋白降解速率加快;并且在相同鈣離子濃度下,肌聯(lián)蛋白在堿性磷酸酶組降解較快,表明去磷酸化可以促進(jìn)肌聯(lián)蛋白的降解。
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