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利用壇紫菜藻紅蛋白制備脯氨酰內(nèi)肽酶抑制肽
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 124 發(fā)表時(shí)間: 2019-09-26
作者: 謝雪瓊,鐘 嬋,孫樂常,翁 凌,張凌晶,劉光明,曹敏杰
關(guān)鍵詞: 壇紫菜|藻紅蛋白|脯氨酰內(nèi)肽酶抑制活性|分子質(zhì)量分布|抑制動(dòng)力學(xué)
摘要:

以壇紫菜(Porphyra haitanensis)為原料,通過硫酸銨鹽析和DEAE-Sepharose陰離子交換柱層析等方法分離純化得到一種高純度藻紅蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)(A565 nm/A280 nm=5.4)。利用胃、腸液消化酶對R-PE進(jìn)行酶解制備脯氨酰內(nèi)肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)抑制肽。酶解條件為:1)胃蛋白酶與R-PE比例0.5%(m/m),酶解時(shí)間30 min,pH 1.2,溫度37 ℃;2)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶質(zhì)量比為1∶1的混合酶,其與R-PE比例0.25%(m/m),酶解時(shí)間30 min,pH 7.5,溫度37 ℃。Tricine-十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳分析發(fā)現(xiàn),經(jīng)兩步酶解,R-PE被完全降解。采用凝膠過濾色譜法測得R-PE水解液中分子質(zhì)量在3 kDa以下的小肽含量為86.06%。R-PE水解液對PEP抑制水平IC50為136.35 μg/mL。酶抑制動(dòng)力學(xué)研究發(fā)現(xiàn),R-PE水解液對PEP表現(xiàn)為可逆的非競爭性抑制作用,抑制常數(shù)Ki為14 μg/mL。本研究利用壇紫菜R-PE制備活性高的PEP抑制肽,將為壇紫菜深加工及高值化利用提供一定的理論參考。

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