分析鰱魚(yú)Cystatin C(HmCystatin C)對(duì)冷藏魚(yú)肉片質(zhì)構(gòu)品質(zhì)的保持效果,及其對(duì)基于線粒體途徑的肌肉細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用,旨在探究HmCystatin C作為冷藏水產(chǎn)品潛在天然生物保鮮劑的可能作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)首先對(duì)草魚(yú)肉片進(jìn)行HmCystatin C注射處理,在經(jīng)Western blot驗(yàn)證HmCystatin C細(xì)胞滲透有效性的基礎(chǔ)上,從質(zhì)構(gòu)、組織學(xué)特性、組織蛋白酶B/L酶活性及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平監(jiān)測(cè)4 ℃冷藏72 h內(nèi)魚(yú)肉片品質(zhì)的變化。進(jìn)而通過(guò)免疫組化法、Tunel染色法、分光光度法及透射電鏡檢測(cè)冷藏期間肌肉細(xì)胞凋亡、線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)開(kāi)放性、線粒體膜電位以及線粒體形態(tài)損傷程度,同時(shí)利用熒光測(cè)活法和Western blot分析Caspase-3、Caspase-9活性及蛋白表達(dá)量變化。結(jié)果表明HmCystatin C能有效滲透至組織細(xì)胞內(nèi)并持續(xù)存在,實(shí)驗(yàn)組(Cys組)冷藏期間的剪切力和硬度均顯著高于對(duì)照(Con組),而細(xì)胞間隙、組織蛋白酶B/L活性及ROS水平均明顯低于Con組,尤其質(zhì)構(gòu)劣化被延緩至少24 h;且HmCystatin C明顯抑制了Cys組的線粒體功能和形態(tài)的損傷程度。同時(shí)Cys組的Caspase-3、Caspase-9活性被不同程度地抑制,蛋白表達(dá)量亦低于Con組。綜上推測(cè)抑制線粒體途徑細(xì)胞凋亡及其相關(guān)Caspases活性是HmCystatin C延緩冷藏草魚(yú)肉片品質(zhì)劣化的機(jī)制之一。
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