采用酶法制備辣木籽水解物,以抗氧化活性為跟蹤指標,通過乙醇分級沉淀和大孔樹脂柱層析法定向制備辣木籽抗氧化肽,構(gòu)建模擬胃、腸道消化模型,評價辣木籽抗氧化肽胃、腸道消化物的氧自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC),利用超高效液相色譜-四極桿-高分辨飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)解析消化物中多肽組成與結(jié)構(gòu),建立2,2’-偶氮二異丁脒鹽酸鹽(2,2’-azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride,AAPH)誘導(dǎo)大鼠紅細胞氧化損傷模型,研究經(jīng)胃、腸道消化后的辣木籽抗氧化肽對氧化損傷紅細胞溶血的抑制作用。結(jié)果表明:采用20%(體積分數(shù),下同)、40%乙醇分級沉淀辣木籽水解物去除雜質(zhì),取60%乙醇分級沉淀組分進行柱層析分離純化,經(jīng)水、20%乙醇、40%乙醇洗脫除雜,采用60%乙醇洗脫,定向制備得到富含抗氧化氨基酸、疏水性氨基酸的辣木籽抗氧化肽(蛋白質(zhì)量分數(shù)92.84%,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力、ORAC分別為39.95、1454.57 μmol/g);辣木籽抗氧化肽經(jīng)模擬胃、腸道消化后,抗氧化活性增強,釋放出更多短肽段,包括11條二肽、5 條三肽;辣木籽抗氧化肽消化物、Gln-Met、Leu-Phe通過清除胞內(nèi)活性氧,下調(diào)丙二醛含量與超氧化物歧化酶活力,拮抗AAPH所致氧化應(yīng)激,有效抑制氧化損傷紅細胞發(fā)生溶血。
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