領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：根皮苷-2-O-糖基轉(zhuǎn)移酶（phloridzin 2’-O-glycosyltransferase，P2’-GT）是根皮苷合成最后一步關(guān)鍵酶，可以把根皮素轉(zhuǎn)化成根皮苷，本研究在富士蘋(píng)果中克隆出P2’-GT基因，對(duì)基因編碼產(chǎn)物進(jìn)行生物信息學(xué)分析和基因的表達(dá)模式分析。方法：以蘋(píng)果皮為材料，提取RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA為模板，設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序，利用Pro Param tool、TMHMM等在線軟件對(duì)編碼蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析，利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（realtime fluorescence quatitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）分析P2’-GT在蘋(píng)果不同部位、不同蘋(píng)果品種和不同生長(zhǎng)時(shí)期的表達(dá)差異。結(jié)果：P2’-GT cDNA全長(zhǎng)1 452 bp，編碼483 個(gè)氨基酸，相對(duì)分子質(zhì)量53.6 kDa，等電點(diǎn)5.76，該基因編碼蛋白是不穩(wěn)定蛋白，不具有明顯的跨膜結(jié)構(gòu)，二級(jí)結(jié)構(gòu)主要有α-螺旋、無(wú)規(guī)卷曲和延伸鏈組成，三級(jí)結(jié)構(gòu)結(jié)果顯示P2’-GT蛋白模型與對(duì)苯二酚葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶相似度最高（41.32%），進(jìn)化分析表明P2’-GT與白梨糖基轉(zhuǎn)移酶同源性最高。RTFQ-PCR分析發(fā)現(xiàn)P2’-GT在3 種蘋(píng)果皮中均高效表達(dá)，在葉和根中微量表達(dá)，在果肉中不表達(dá)；P2’-GT的轉(zhuǎn)錄表達(dá)受蘋(píng)果發(fā)育調(diào)控，在生長(zhǎng)初期幾乎不表達(dá)，隨著蘋(píng)果發(fā)育表達(dá)量逐漸增加，在生長(zhǎng)中期達(dá)到最高值，隨后開(kāi)始減少，至蘋(píng)果成熟期下降到最高值的50%水平。此外，P2’-GT在3 種蘋(píng)果品種中表達(dá)不同，在澳洲青蘋(píng)中表達(dá)量最高，在嘎啦中表達(dá)量最低。結(jié)論：本研究明確了P2’-GT的生物信息學(xué)特性及P2’-GT基因在不同生長(zhǎng)期和不同部位的表達(dá)差異，為調(diào)控根皮苷合成的研究提供理論依據(jù)。
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