目的:建立基于實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)技術(shù)檢測(cè)蓮蓉制品中蕓豆成分的方法。方法:以蕓豆pvsbe2基因高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針,通過(guò)對(duì)蓮子及其他富含淀粉類(lèi)植物DNA進(jìn)行擴(kuò)增,以驗(yàn)證方法的特異性;以1?ng/μL的蕓豆DNA進(jìn)行系列稀釋?zhuān)_定此法檢測(cè)靈敏度;對(duì)含有1%蕓豆與蓮子的混合樣品的DNA模板進(jìn)行10?倍梯度稀釋?zhuān)_定重量檢測(cè)靈敏度;并應(yīng)用此方法和PCR方法對(duì)市場(chǎng)樣品進(jìn)行了檢測(cè),對(duì)建立的熒光PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:該檢測(cè)方法具有高度特異性,與蓮子及其他高淀粉植物無(wú)交叉反應(yīng);DNA質(zhì)量濃度的檢測(cè)靈敏度達(dá)到1?pg/μL,重量檢測(cè)靈敏度可達(dá)0.01%。含蕓豆成分的蓮蓉月餅擴(kuò)增陽(yáng)性,檢測(cè)結(jié)果與食品標(biāo)簽相符。結(jié)論:本研究建立的實(shí)時(shí)熒光PCR方法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便的特點(diǎn),更適合蓮蓉制品中蕓豆成分的快速檢測(cè)。
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