領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
建立基于QX100微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）平臺(tái)的我國(guó)未批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因玉米品系VCO-01981-5的二重微滴式數(shù)字PCR定量檢測(cè)方法。該方法選擇基因組中單拷貝的玉米內(nèi)源基因hmg和VCO-01981-5品系邊界序列為定量靶序列，分別設(shè)計(jì)不同的PCR擴(kuò)增引物和TaqMan探針，并對(duì)兩種探針用不同的熒光進(jìn)行標(biāo)記，然后將上述探針和引物置于同一個(gè)PCR反應(yīng)體系中以同時(shí)定量?jī)蓚€(gè)靶標(biāo)序列。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該法只有VCO-01981-5品系的兩個(gè)靶序列才都有擴(kuò)增信號(hào)。靈敏度、線性和準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在定量結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于25%時(shí)，最低可穩(wěn)定定量5 個(gè)拷貝的VCO-01981-5品系特異性序列分子和4 個(gè)拷貝的內(nèi)源基因hmg分子；而在高達(dá)50 ng模板DNA以下范圍內(nèi)，PCR反應(yīng)模板量與測(cè)定樣品拷貝數(shù)之間呈高度正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.99以上；平均誤差小于10%。結(jié)果表明本研究建立的該玉米品系定量方法特異性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，精確性、準(zhǔn)確性以及靈敏度高，定量范圍廣，可用于進(jìn)、出口農(nóng)產(chǎn)品和食品中該轉(zhuǎn)基因玉米品系成分的定量檢測(cè)。此外，該法還可為其他轉(zhuǎn)基因玉米品系及其他轉(zhuǎn)基因作物品系建立類(lèi)似定量檢測(cè)方法提供參考。
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