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高產(chǎn)β-葡萄糖苷酶工程菌株的構(gòu)建及其在2,6-二甲氧基對苯醌發(fā)酵制備中的應(yīng)用
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 119 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 易曉男,任清華,程 煒,孫 姜,齊 斌,王立梅
關(guān)鍵詞: 釀酒酵母;β-葡萄糖苷酶;畢赤酵母;高效表達(dá);2,6-二甲氧基對苯醌
摘要:

構(gòu)建高產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的工程菌株并將其應(yīng)用到2,6-二甲氧基對苯醌的發(fā)酵制備中。通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)從釀酒酵母CS1401的總DNA中擴(kuò)增得到β-葡萄糖苷酶基因,并與載體pPICZαA連接后導(dǎo)入畢赤酵母X33中進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)表達(dá);對表達(dá)成功的重組菌株進(jìn)行β-葡萄糖苷酶活力測定;同時將釀酒酵母CS1401和重組菌株接種到小麥胚芽培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵并測定2,6-二甲氧基對苯醌的發(fā)酵產(chǎn)量。結(jié)果表明,釀酒酵母CS1401的β-葡萄糖苷酶基因在畢赤酵母X33工程菌株中得到高效表達(dá),酶活力達(dá)到4.5 U/mL,為釀酒酵母CS1401的5 倍;2,6-二甲氧基對苯醌的搖瓶發(fā)酵產(chǎn)量達(dá)到935.7 μg/g,比釀酒酵母CS1401提高了0.4 倍。因此,高產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的重組工程菌株在2,6-二甲氧基對苯醌的發(fā)酵制備中具有一定的應(yīng)用前景。

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