領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
建立可同時檢測鮮切哈密瓜中的單增李斯特菌、鼠傷寒沙門氏菌和大腸桿菌O157:H7的多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測方法。根據(jù)單增李斯特菌inlA基因、鼠傷寒沙門氏菌invA基因、大腸桿菌O157:H7的wzy基因設(shè)計3 對特異性引物。對多重PCR反應(yīng)體系中的引物濃度、退火溫度、Mg2＋濃度、dNTP濃度進(jìn)行了優(yōu)化，并確定適宜的多重PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)條件。結(jié)果表明：25 μL反應(yīng)體系，10×PCR buffer為2.5 μL，MgCl2（25 mmol/L）為3.5 μL，dNTPs（2.5 mmol/L）為2 μL，inlA基因上下游引物（5 μmol/L）為1 μL，invA基因上下游引物（5 μmol/L）為1 μL，wzy基因上下游引物（5 μmol/L）為2 μL，單增李斯特菌DNA模板為1 μL，鼠傷寒沙門氏菌DNA模板為1 μL，大腸桿菌O157:H7 DNA模板為1 μL，exTaq DNA聚合酶（5 U/L）為0.3 μL，加ddH2O補足25 μL。反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，53.9 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，32 個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。鮮切哈密瓜中人工接種的目標(biāo)菌的靈敏度為單增李斯特菌2.7×104 CFU/g，大腸桿菌O157:H7 3.3×104 CFU/g以及鼠傷寒沙門氏菌3.8×104 CFU/g。該技術(shù)可為快速檢測鮮切哈密瓜中病原菌污染度及其控制提供參考依據(jù)。
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