采用反向代謝工程的策略,以谷氨酸棒桿菌ATCC 13032野生型為出發(fā)菌株,利用無抗性標(biāo)記的同源重組方法,敲除了編碼葡萄糖pts系統(tǒng)關(guān)鍵轉(zhuǎn)運蛋白基因ptsG、ptsH-ptsI和葡萄糖轉(zhuǎn)運系統(tǒng)關(guān)鍵轉(zhuǎn)運蛋白基因abc、abc2和iolt1,得到了5 株逐次敲除了相應(yīng)基因的突變株。結(jié)果表明:當(dāng)以葡萄糖為唯一碳源培養(yǎng)時,CGδptsG菌株的葡萄糖的消耗是野生型的50%,菌體OD值為1.473;CGδptsH-ptsI菌株的葡萄糖的消耗是野生型的39.5%,菌體OD值為1.226;CGδabc菌株的葡萄糖的消耗是野生型的36%,菌體OD值為1.092;CGδabc2菌株的葡萄糖的消耗是野生型的26.2%,菌體OD值為0.486;CGδiolt1葡萄糖的消耗和菌體生長OD值為0,實現(xiàn)了谷氨酸棒狀桿菌葡萄糖代謝的阻斷,說明ptsG、ptsH-ptsI、abc、abc2和iolt1所編碼的轉(zhuǎn)運蛋白具有葡萄糖轉(zhuǎn)運功能。
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