以巨大芽孢桿菌Z2013513基因組DNA為模板,分別PCR擴(kuò)增得到L-乳酸脫氫酶基因(ldhL)和葡萄糖脫氫酶基因(gdh),將gdh與ldhL分別連接至表達(dá)載體pETDuet,獲得共表達(dá)質(zhì)粒pETDuet-ldhL-gdh。經(jīng)轉(zhuǎn)化和驗(yàn)證獲得重組菌大腸桿菌BL21(DE3)/pETDuet-ldhL-gdh。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳和比酶活力分析表明重組蛋白L-乳酸脫氫酶和葡萄糖脫氫酶均成功表達(dá)且具有酶活力。在37 ℃、200 r/min條件下,經(jīng)60 min反應(yīng),催化底物苯丙酮酸合成24.26 mmol/L L-苯基乳酸。產(chǎn)物L(fēng)-苯基乳酸光學(xué)純度(>99%),底物摩爾轉(zhuǎn)化率(59.55%),結(jié)果表明此重組體系可用于高效合成高光學(xué)純L-苯基乳酸。
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