領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：克隆小麥蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶（wheat protein disulfide isomerase，wPDI）基因，實(shí)現(xiàn)其在大腸桿菌中的表達(dá)并探究其酶學(xué)性質(zhì)。方法：以小麥種子總RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄并擴(kuò)增得到wpdi，并以pET-30b為表達(dá)載體、大腸桿菌BL21（DE3）為宿主菌進(jìn)行原核表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)金屬螯合層析純化后進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)研究。結(jié)果：克隆的基因全長(zhǎng)1 548 bp，與“Wyuna”品種小麥wpdi基因相似性達(dá)99%。構(gòu)建了pET-30b-wpdi表達(dá)載體，獲得wPDI的最佳表達(dá)條件為：誘導(dǎo)溫度22 ℃，誘導(dǎo)時(shí)間6 h，誘導(dǎo)劑濃度0.5 mmol/L。該酶含4 個(gè)硫氧還蛋白結(jié)構(gòu)域，分子質(zhì)量約為66.2 kD，具有二硫鍵的還原酶和異構(gòu)酶活性以及分子伴侶活性。結(jié)論：對(duì)重組wPDI的表達(dá)和酶學(xué)性質(zhì)研究，為wPDI在面制品加工及其他方面的應(yīng)用提供參考依據(jù)。
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