目的:探究纖維素酶酶法制備稠李花色苷的最佳條件,并研究制備的稠李花色苷對H2O2誘導(dǎo)的大鼠胰島素瘤(Ins-1)細胞損傷的保護作用。方法:通過單因素試驗和正交試驗,優(yōu)化得到酶法制備稠李花色苷的最佳條件;稠李花色苷處理大鼠Ins-1細胞,進行形態(tài)學(xué)觀察、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]細胞活力實驗、2’,7’-二氫二氯熒光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)熒光探針法檢測細胞內(nèi)活性氧實驗研究稠李花色苷對H2O2誘導(dǎo)損傷的Ins-1細胞保護作用。結(jié)果:纖維素酶法提取稠李花色苷的最佳條件為:溫度60 ℃、纖維素酶添加量9 mg/g、料液比1∶35(g/mL)、pH 3.5,此條件下稠李花色苷得率為(0.956±0.027) mg/g;形態(tài)學(xué)觀察及MTT細胞活力實驗顯示,稠李花色苷對H2O2誘導(dǎo)損傷的Ins-1細胞具有較強的保護作用,DCFH-DA法檢測細胞內(nèi)活性氧實驗說明,稠李花色苷能夠顯著地清除Ins-1細胞內(nèi)的活性氧。結(jié)論:纖維素酶法制備稠李花色苷是一種有效的方法,制備的稠李花色苷對H2O2誘導(dǎo)的大鼠Ins-1細胞損傷具有較強的保護作用。
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