目的:為促進(jìn)麥胚的高值化利用,建立H2O2誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞(osteoblast,OB)-破骨細(xì)胞(osteoclast,OC)共育體系氧化應(yīng)激模型,探究麥胚源活性肽ADWGGPLPH對(duì)OB和OC活性的影響。方法:利用流式細(xì)胞術(shù)、噻唑藍(lán)(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT)增殖實(shí)驗(yàn)、異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,F(xiàn)ITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)雙染等方法,明確麥胚源活性肽對(duì)氧化應(yīng)激環(huán)境中OB增殖和凋亡的作用。利用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活力檢測(cè)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定以及抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色等方法研究麥胚源活性肽對(duì)氧化應(yīng)激共育體系中OB和OC分化活性的影響。結(jié)果:麥胚源活性肽能夠有效抑制氧化應(yīng)激共育體系中OB內(nèi)活性氧的增加,并通過(guò)抑制丙二醛生成,增強(qiáng)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、超氧化物歧化酶活力,提高OB免受自由基攻擊以及清除自由基的能力。麥胚源活性肽可顯著抑制氧化應(yīng)激共育體系中OB凋亡(FITC/PI雙染結(jié)果顯示OB凋亡率由12.4%下調(diào)至5.3%,OB細(xì)胞活力由60.4%提高至92.8%(P<0.01)),改善了OB增殖水平。此外,麥胚源活性肽對(duì)OB早期分化活性指標(biāo)ALP活力、蛋白I型膠原以及晚期分化活性指標(biāo)骨鈣素水平的下降具有良好改善作用,OB礦化率從21.3%提高至84.3%(P<0.01),從而使OB發(fā)揮良好的分化活性和礦化功能。TRAP染色結(jié)果顯示麥胚源活性肽也能有效抑制氧化應(yīng)激造成的OC過(guò)度分化(OC相對(duì)陽(yáng)性面積從376.4%減小至128.1%(P<0.01))。結(jié)論:麥胚源活性肽對(duì)H2O2誘導(dǎo)的OB-OC共育體系中細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用,從而維持良好的細(xì)胞穩(wěn)態(tài),本實(shí)驗(yàn)可為麥胚蛋白的開發(fā)利用提供一定的理論參考。
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