領(lǐng)學術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
以黑曲霉Aspergillus niger基因組DNA為模板，PCR擴增出酸性α-淀粉酶的結(jié)構(gòu)基因，將此基因插入載體pPIC9K，重組質(zhì)粒pPIC9K-asAA轉(zhuǎn)化畢赤酵母SMD1168，并通過G418平板培養(yǎng)基篩選高拷貝轉(zhuǎn)化子。在酵母α-Factor及AOX1基因啟動子和終止信號的調(diào)控下，酸性α-淀粉酶大量表達并分泌到胞外，該酶的表達受甲醇的嚴格調(diào)控和誘導，搖瓶培養(yǎng)中，2%甲醇誘導培養(yǎng)168h后酶活力達到最大值2838U/mL。SDS-PAGE結(jié)果顯示該重組酶的分子質(zhì)量為58kD。該酶的最適反應pH值為4.0，在pH3.0～6.0之間酶活力基本保持穩(wěn)定，最適反應溫度為70℃，在工業(yè)生產(chǎn)常用溫度50℃條件下，該酶能夠長時間保持穩(wěn)定，并具有較高的酶活力。重組畢赤酵母遺傳穩(wěn)定性良好。
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