為探索馬氏珍珠貝肉的水解規(guī)律及快速鑒定血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性肽,本研究以不同時(shí)間(2、4、6、8、10 h)的酶解物為對象,采用三羥甲基甘氨酸-十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳、分子質(zhì)量分布、反相高效液相色譜(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)表征其水解規(guī)律。另外,對10 h酶解物進(jìn)行初步分離純化,鑒定高活性組分中的肽序列,并采用分子對接的方法對鑒定的肽進(jìn)行篩選,驗(yàn)證篩選肽的活性,闡釋其抑制機(jī)理。結(jié)果表明,馬氏珍珠貝肉在酶解過程中,大分子質(zhì)量蛋白逐漸水解為小分子肽,在RP-HPLC上出現(xiàn)某一特征峰的富集。初步分離后,發(fā)現(xiàn)F2、F3組分具有較高的ACE抑制活性,從這2 個(gè)組分中共獲得了可信度較高的54 個(gè)肽序列。分子對接篩選出6 個(gè)潛在的ACE抑制肽,在1 mg/mL時(shí),5 個(gè)肽具有不同程度的ACE抑制活性,其中,WFHAVFW和WHAFLW顯示了最高的ACE抑制活性,分別為(95.57±0.37)%和(98.59±0.08)%,進(jìn)一步測定六肽WHAFLW的半抑制濃度(IC50)值,為52.39 μmol/L。分子對接顯示肽的抑制機(jī)理可能是通過氫鍵、范德華作用以及Pi-Pi作用形成穩(wěn)定的肽-酶復(fù)合物。本研究既揭示了珍珠貝肉蛋白不同酶解時(shí)間的規(guī)律變化,又將活性實(shí)驗(yàn)跟蹤與計(jì)算機(jī)輔助篩選相結(jié)合,提供了一種快速篩選酶解物中高活性ACE抑制肽的方法。
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