建立一種同時(shí)快速檢測(cè)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和蠟樣芽孢桿菌的三重實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法。以沙門氏菌invA基因、金黃色葡萄球菌Sa442基因和蠟樣芽孢桿菌Cereolysin AB基因?yàn)榘谢蛟O(shè)計(jì)引物和TaqMan探針,建立多重real-time PCR方法,對(duì)該方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證,并對(duì)實(shí)際的散裝即食肉制品樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,該方法特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好。對(duì)15 株非目標(biāo)菌進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果均為陰性;3 種致病菌的定量線性濃度范圍為102~108 CFU/mL,且定量檢測(cè)批內(nèi)和批間的變異系數(shù)均小于2%;沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和蠟樣芽孢桿菌在未增菌的即食肉制品樣品中檢出限分別為3.8×102、4.9×102 CFU/mL和5.7×102 CFU/mL,經(jīng)增菌5 h后,檢出限提高到3.8、4.9 CFU/mL和5.7 CFU/mL。對(duì)100 份實(shí)際樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)方法一致,說(shuō)明建立的多重real-time PCR法可以用于散裝即食肉制品中3 種致病菌的檢測(cè)。
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