目的:以課題組構(gòu)建的鈍齒棒桿菌(Corynebacterium crenatum)MT NAGK M4 ΔproBΔNcgl1221ΔdtsR1(CCM01)為出發(fā)菌株,探究吐溫(Tween)對(duì)該菌產(chǎn)精氨酸代謝的影響。方法:優(yōu)化精氨酸發(fā)酵及Tween質(zhì)量濃度,測(cè)定菌體生長(zhǎng)量、L-精氨酸產(chǎn)量、發(fā)酵液殘?zhí)橇靠疾霻ween 40、Tween 80及Tween 80結(jié)合油酸對(duì)菌株CCM01產(chǎn)精氨酸的影響;采用實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)L-精氨酸合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果:在CCM01菌株發(fā)酵中添加Tween 40、Tween 80及Tween 80結(jié)合油酸,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate,NADPH)供應(yīng)提升,相應(yīng)精氨酸產(chǎn)量提高,尤其在Tween 80和油酸按物質(zhì)的量比1∶0.1添加的培養(yǎng)條件下,與出發(fā)菌株CCM01相比,胞內(nèi)NADPH的生成提升至2.56 倍,L-精氨酸產(chǎn)量提高了29.43%;同時(shí),合成NADPH的磷酸戊糖途徑相關(guān)基因上調(diào),作為L(zhǎng)-精氨酸合成途徑的負(fù)調(diào)控因子——脂肪酸響應(yīng)蛋白FarR編碼基因下調(diào),相應(yīng)的L-精氨酸合成途徑相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平上調(diào),表明吐溫可從兩方面提高精氨酸產(chǎn)量。
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