目的:以中性乳糖酶為原料,研究超高壓處理引發(fā)酶活力變化與熒光強(qiáng)度的關(guān)系。方法:采用不同超高壓條件(不同壓力(0.1、100、200、300、400、500、600?MPa)和溫度(室溫(18?℃)、20、25、30、35、40、45?℃)下處理不同時(shí)間(10、20、30、40、50、60?min))處理乳糖酶,利用鄰硝基苯-β-D-半乳糖苷法檢測乳糖酶活力,熒光法檢測乳糖酶分子內(nèi)源性和外源性熒光強(qiáng)度的變化,皮爾遜雙尾分析法分析酶活力與熒光強(qiáng)度之間的相關(guān)性。結(jié)果:在不同壓力(0.1~600?MPa)和30?℃下處理10?min,在0.1~400?MPa范圍內(nèi),隨壓力增大乳糖酶活力升高,在400?MPa時(shí)酶活力達(dá)到最大值,與對(duì)照組(0.1 MPa)相比,酶活力提高了13.30%;400~600?MPa范圍內(nèi),隨壓力增大酶活力降低;在該條件下處理可引發(fā)乳糖酶分子內(nèi)源性和外源性熒光強(qiáng)度的變化,二者均在400?MPa下產(chǎn)生最大熒光強(qiáng)度,且與酶活力之間有極顯著相關(guān)性(P<0.01)。在30?℃和300?MPa壓力下處理10~60?min,酶活力隨時(shí)間延長呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢,在20?min時(shí)酶活力達(dá)到最大值,與對(duì)照組(0?min)相比酶活力提高了14.83%;在該條件下處理能夠引發(fā)乳糖酶分子的內(nèi)源性和外源性熒光強(qiáng)度變化,二者均在20?min時(shí)產(chǎn)生最大熒光強(qiáng)度,且與酶活力之間有極顯著相關(guān)性(P<0.01)。在300?MPa、不同溫度(18~45?℃)下處理10?min,在18~30?℃范圍內(nèi),隨溫度升高,酶活力呈上升趨勢,且在30?℃時(shí)酶活力達(dá)到最大值,與對(duì)照組(室溫)相比,酶活力提高了7.46%;30~45?℃范圍內(nèi)酶活力呈現(xiàn)下降趨勢,但在30~35?℃范圍內(nèi),酶活力仍高于對(duì)照組;在該條件下處理可引發(fā)乳糖酶分子的內(nèi)源性和外源性熒光強(qiáng)度變化,且與酶活力之間有極顯著相關(guān)性(P<0.01)。結(jié)論:不同超高壓條件下處理能夠引發(fā)乳糖酶活力和分子熒光強(qiáng)度的變化;乳糖酶活力變化與其分子的熒光強(qiáng)度有極顯著相關(guān)性(P<0.01),即乳糖酶活力變化與其三級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變有關(guān)。
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