領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
本研究旨在為低聚半乳糖（galactooligosaccharide，GOS）的合成提供新的雙歧桿菌酶源， 對Bifidobacterium bifidum ATCC 29521的β-半乳糖苷酶（β-galATCC29521）進行生物信息學(xué)分析，并在Escherichia coli BL21(DE3)中實現(xiàn)異源表達。研究β-galATCC29521的異源表達條件和發(fā)酵優(yōu)化條件、酶學(xué)性質(zhì)及其在乳清體系合成GOS的應(yīng)用。生物信息學(xué)分析表明β-galATCC29521屬于糖苷水解酶家族2，不存在信號肽和跨膜區(qū)。發(fā)酵優(yōu)化實驗結(jié)果表明，E. coli BL21(DE3)-pET28a-β-galATCC29521重組菌在含有10 g/L蔗糖、12 g/L胰蛋白胨、24 g/L酵母粉的培養(yǎng)基中，且0.05 mmol/L的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷在27 ℃誘導(dǎo)培養(yǎng)16 h后，酶活力可達318.03 U/mL。粗酶液經(jīng)過鎳柱親和層析得到電泳純蛋白，其最適pH值和最適溫度分別為7.5和40 ℃。β-galATCC29521純化酶在溫度10～30 ℃和pH 6.5～9.0范圍內(nèi)表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。Mn2＋和Mg2＋可顯著提高酶活性，Cu2＋和Fe3＋則顯著抑制酶活性。以乳清為底物合成GOS時，該酶的產(chǎn)率為29.83%。研究結(jié)果表明β-galATCC29521在GOS的制備領(lǐng)域中具有潛在的應(yīng)用價值。
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