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大蒜胞外囊泡活性成分解析及其緩解小鼠結(jié)腸炎作用
來源：食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 187 發(fā)表時(shí)間: 2023-05-16
作者: 廖柳月，朱珍珠，楊倩，劉琴
關(guān)鍵詞: 大蒜；胞外囊泡；活性成分；抗炎活性；結(jié)腸炎
摘要:

目的：解析大蒜胞外囊泡（garlic-derived extracellular nanovesicles，GENs）的活性成分并探究其對(duì)小鼠結(jié)腸炎的作用。方法：采用超速離心與蔗糖密度梯度離心法從蒜汁中分離純化GENs，并對(duì)其形貌和結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)GENs進(jìn)行脂質(zhì)分析和蛋白質(zhì)組學(xué)分析；采用RNA轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)進(jìn)行小RNA（microRNA，miRNA）序列鑒定和靶基因預(yù)測(cè)分析。構(gòu)建Caco-2單層腸上皮細(xì)胞模型，脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激后，通過熒光光譜測(cè)定細(xì)胞滲透表觀系數(shù)；采用試劑盒法測(cè)定上清液中一氧化氮（nitric oxide，NO）含量；采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）測(cè)定細(xì)胞上清液中白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）質(zhì)量濃度。C57BL/6J小鼠口服給予GENs（20、100、500 mg/（kg mb·d）），評(píng)估GENs的毒性，同時(shí)考察GENs對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%葡聚糖硫酸鈉（dextran sulphate sodium，DSS）誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠的疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index，DAI）評(píng)分和結(jié)腸長(zhǎng)度的影響；采用蘇木精和伊紅對(duì)結(jié)腸組織切片進(jìn)行染色；采用ELISA和試劑盒法測(cè)定小鼠血清中IL-6、IFN-γ、TNF-α和NO的水平。結(jié)果：GENs為納米級(jí)杯狀囊泡，含有26 種脂質(zhì)、62 種蛋白質(zhì)和317 種miRNA，脂質(zhì)中磷脂酰膽堿（phosphatidylcholine，PC）含量最高，預(yù)測(cè)出5 種miRNAs可靶向編碼人炎性細(xì)胞因子的基因。GENs能顯著減輕LPS引起Caco-2單層細(xì)胞的損傷，抑制NO的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-6、IFN-γ、TNF-α和IL-1β分泌水平。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，各劑量范圍內(nèi)GENs無毒性；當(dāng)GENs劑量為100 mg/（kg mb·d）時(shí)能顯著降低小鼠DAI評(píng)分（P＜0.05），改善DSS引起的結(jié)腸縮短和病理損傷，下調(diào)DSS引起的血清中IL-6、IFN-γ及NO水平升高。結(jié)論：GENs可能通過磷脂酰膽堿和特定miRNA共同作用，保護(hù)腸道屏障損傷，調(diào)節(jié)炎性介質(zhì)分泌水平，抑制細(xì)胞內(nèi)炎癥反應(yīng)，緩解DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎。

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