建立CRISPR-Cas9介導(dǎo)的在Saccharomyces cerevisiae雙倍體細(xì)胞中進(jìn)行基因敲除的方法。以can1基因敲除后的表型驗證該CRISPR-Cas9系統(tǒng)的有效性,can1基因的失活效率達(dá)到4%。利用該系統(tǒng)又分別敲除了pdc、adh3、adh2、adh1、 pdh等基因,單基因編輯效率分別為4/48、3/48、1/48、3/28、1/16。確定了基因連續(xù)敲除的方法流程,pdc、adh3、adh2三個基因全部敲除,整個過程用時17 d。探索了雙基因一次轉(zhuǎn)化同時敲除的方法,將adh5、lip兩個基因同時敲除用時6 d,基因編輯效率分別為9/32和10/32。
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