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—— 中國(guó)食品雜志社
魷魚(yú)肝臟含有豐富的蛋白酶，為利用其內(nèi)源蛋白酶進(jìn)行可控的酶解，本研究以鯉魚(yú)肌原纖維蛋白為底物對(duì)魷魚(yú)肝臟內(nèi)源蛋白酶的種類(lèi)和性質(zhì)進(jìn)行了研究。反應(yīng)體系中添加E-64、1,10-菲啰啉和苯甲基磺酰氟（phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF）后，肌球蛋白重鏈（myosin heavy chain，MHC）的降解得到了顯著抑制，確定了魷魚(yú)肝臟含有金屬類(lèi)、半胱氨酸類(lèi)、絲氨酸類(lèi)3?類(lèi)蛋白酶。半胱氨酸類(lèi)蛋白酶熱穩(wěn)定性最好，在50?℃以上仍然具有較大活性，可將肌原纖維蛋白酶解成小分子質(zhì)量的降解產(chǎn)物。利用特異性底物對(duì)半胱氨酸蛋白酶種類(lèi)進(jìn)行鑒定發(fā)現(xiàn)，該酶只酶解Z-Phe-Arg-MCA，添加亮抑酶肽后相對(duì)酶活性為0%，添加E-64相對(duì)酶活性?xún)H存0.6%，初步確定魷魚(yú)肝臟中的半胱氨酸蛋白酶主要為組織蛋白酶L。最后，通過(guò)硫酸銨沉淀、離子交換層析、凝膠過(guò)濾對(duì)組織蛋白酶L進(jìn)行分離純化，在電泳上得到了分子質(zhì)量約為25?kD單一條帶。
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