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金銀花過(guò)氧化物酶的三相分離純化及酶學(xué)性質(zhì)
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 148 發(fā)表時(shí)間: 2017-12-08
作者: 羅磊,董金龍,朱文學(xué),薛依涵,關(guān)寧寧,張寬,姬青華
關(guān)鍵詞: 金銀花;過(guò)氧化物酶;三相分離法;酶學(xué)性質(zhì)
摘要:

采用三相分離法提取純化金銀花中過(guò)氧化物酶,結(jié)果表明最優(yōu)純化條件為pH?5.60、硫酸銨質(zhì)量濃度39.49?g/100?mL、提取液與叔丁醇體積比1∶1.38,在該條件下純化倍數(shù)為5.849,回收率為87.64%。金銀花過(guò)氧化物酶比活力為1?021.6?U/mg,色素清除率為92%;酶學(xué)性質(zhì)研究表明:金銀花過(guò)氧化物酶最適溫度為30?℃,熱穩(wěn)定范圍為10~40?℃;最適pH值為5,pH值穩(wěn)定范圍為4~7。在金銀花過(guò)氧化物酶催化的雙底物酶促反應(yīng)中,當(dāng)H2O2濃度一定時(shí),酶對(duì)愈創(chuàng)木酚的Km值為8.12?mmol/L,vmax值為1.71?mmol/(min·L)。當(dāng)愈創(chuàng)木酚濃度一定時(shí),H2O2的Km值為0.822?mmol/L,vmax值為1.38?mmol/(min·L)。金銀花過(guò)氧化物酶與底物的親和力由強(qiáng)到弱依次是鄰苯三酚、鄰苯二酚、聯(lián)甲氧基苯胺、愈創(chuàng)木酚。Ca2+、Cu2+、Zn2+對(duì)金銀花過(guò)氧化物酶有激活作用,Mg2+、Mn2+、檸檬酸、抗壞血酸、L-半胱氨酸、亞硫酸鈉、偏重亞硫酸鈉、十二烷基磺酸鈉對(duì)金銀花過(guò)氧化物酶有不同程度的抑制作用。

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