領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
通過密碼子優(yōu)化、昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（Bac-to-Bac）構(gòu)建、表達(dá)條件篩選及鎳柱親和層析，研究β2腎上腺素受體（β2 adrenergic receptor，β2AR）基因（β2AR）在昆蟲細(xì)胞Sf9中的高效表達(dá)及純化策略。方法：人工合成改造后的β2AR基因，將其克隆至轉(zhuǎn)移載體pFastBac1中，構(gòu)建重組桿狀病毒表達(dá)質(zhì)粒pFastBac1-β2AR’，轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞Sf9，優(yōu)化表達(dá)條件，采用鎳離子親和層析法純化重組蛋白并進(jìn)行活性鑒定。結(jié)果：適宜的表達(dá)條件為感染細(xì)胞使用的感染復(fù)數(shù)5、感染后表達(dá)時(shí)間48?h，Western blot分析顯示在47?kD左右處出現(xiàn)清晰的特異性條帶，與預(yù)期結(jié)果一致。純化的受體蛋白純度大于90%，活性鑒定結(jié)果顯示該受體蛋白可特異性吸附鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇及萊克多巴胺3?種β激動(dòng)劑的酶標(biāo)記物，OD值分別為0.983、0.947和0.912。結(jié)論：本研究實(shí)現(xiàn)了β2AR受體在Sf9細(xì)胞中的表達(dá)，且純化后的受體蛋白保持了較好的β激動(dòng)劑親和活性，為利用β2AR受體開展β激動(dòng)劑多殘留快速檢測技術(shù)提供了依據(jù)。
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