目的:研究改變肌動(dòng)球蛋白粗提物磷酸化水平對(duì)其解離程度及ATPase活性的調(diào)控作用。方法:以肌動(dòng)球蛋白粗提物為材料,添加蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)改變蛋白的磷酸化水平(4 ℃孵育48 h),通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳和熒光染色、蛋白質(zhì)免疫印跡、ATPase活力測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白的磷酸化水平、游離肌動(dòng)球蛋白含量和肌動(dòng)球蛋白ATPase活力隨孵育時(shí)間的變化。結(jié)果:PKA處理組蛋白樣品中的肌鈣蛋白T和肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈的磷酸化水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05),游離肌動(dòng)蛋白含量顯著高于對(duì)照組,且在0~2 h顯著升高,2~48 h緩慢升高;肌動(dòng)球蛋白ATPase活力顯著低于對(duì)照組(P<0.05),其活力隨孵育時(shí)間延長(zhǎng)顯著升高(P<0.05);AP處理組的變化則與之相反。結(jié)論:肌鈣蛋白T、肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈的磷酸化降低了肌球蛋白與肌動(dòng)蛋白之間的相互作用力(肌動(dòng)球蛋白ATPase活力低),從而促進(jìn)肌動(dòng)球蛋白的解離。
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