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云南萵筍尖酪氨酸酶分離純化及酶學(xué)性質(zhì)
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 134 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 廖海君,李蕊伽,陶 敏,白亞娟,唐 菁,唐云明
關(guān)鍵詞: 云南萵筍尖;酪氨酸酶;分離純化;酶學(xué)性質(zhì)
摘要:

為獲得更多成本廉價(jià)且易得的酪氨酸酶來源,為云南萵筍尖酪氨酸酶抑制劑的研究提供參考,選取云南萵筍尖為實(shí)驗(yàn)材料,通過勻漿、緩沖液抽提、硫酸銨分級(jí)沉淀、DEAE-Sepharose離子交換層析和Superdex-200凝膠過濾層析等方法純化,獲得電泳純的酪氨酸酶,并對(duì)純化后的酪氨酸酶進(jìn)行部分酶學(xué)性質(zhì)研究。結(jié)果表明,云南萵筍尖中酪氨酸酶的比活力為20.62 U/mg,分子質(zhì)量約為995.40 kD,亞基分子質(zhì)量約為65.23 kD。最適反應(yīng)溫度和最適反應(yīng)pH值分別為60 ℃和8.0,在pH 6.0~8.0及20~40 ℃范圍內(nèi)較穩(wěn)定。最適條件下,以左旋多巴為底物的Km值為1.567 mmol/L,vmax為0.037 6 μmol/(min·L)。乙醇、異丙醇、正丁醇對(duì)該酶活性有不同程度的抑制作用;甲醇、Co2+、Mn2+、Pb2+、Ag+、Cd2+、Ba2+、Ca2+對(duì)該酶活性有不同程度的激活作用,Co2+、Mn2+對(duì)該酶具有顯著的激活作用,低濃度的Zn2+、Cu2+、草酸、抗壞血酸對(duì)該酶有激活作用,高濃度時(shí)有抑制作用。尿素、EDTA、Li+、K+、Mg2+對(duì)該酶活性影響較小。

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