目的:研究提取溫度對霍山石斛多糖提取量、理化性質(zhì)以及腸道黏膜免疫活性的影響。方法:在不同提取溫度(40、60、80、100 ℃)條件下水提醇沉法提取霍山石斛多糖(Dendrobium huoshanense polysaccharides,DHP),并測定多糖提取量和特性黏度;采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)、氣相色譜(gas chromatography,GC)、傅里葉變換紅外光譜(Fourier transform infrared spectrometry,F(xiàn)TIR)技術(shù)分析霍山石斛多糖及其陰離子交換色譜水洗組分和鹽洗組分的分子質(zhì)量分布、單糖組成和特征基團;以體外培養(yǎng)的小鼠小腸Peyer結(jié)細胞的培養(yǎng)液對小鼠骨髓細胞增殖作用為指標,測定多糖及其分級組分的腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)活性。結(jié)果:DHP的提取量隨提取溫度的升高而增加,但其特性黏度呈現(xiàn)下降趨勢。HPLC分析表明不同溫度條件下提取的多糖均由高分子質(zhì)量(higher molecular weight,HMW)和低分子質(zhì)量(lower molecular weight,LMW)兩種組分所構(gòu)成,LMW熱穩(wěn)定性好、主要存在于陰離子交換色譜的水洗脫組分(water-eluted fraction,DHPW),HMW熱穩(wěn)定性弱、主要存在于陰離子交換色譜的鹽洗脫組分(salt-eluted fraction,DHPS);GC和FTIR分析顯示,DHPW主要由呈α-構(gòu)型的葡萄糖所組成、不含糖醛酸,DHPS主要由呈β-構(gòu)型的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和甘露糖所組成,且含糖醛酸;不同溫度提取的DHP及其陰離子交換色譜DHPW和DHPS均表現(xiàn)出腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)活性,且DHPS比DHPW具有更強的腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)活性,但它們的活性均隨提取溫度的升高而下降。結(jié)論:不同提取溫度不僅影響DHP的提取量,而且可明顯改變DHP的特性黏度、分子質(zhì)量分布、單糖組成和腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)活性,較高的提取溫度在提高DHP提取量的同時顯著降低DHP中HMW比例,進而導致多糖腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)活性的下降。
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