建立牛乳中蠟樣芽孢桿菌便捷可靠的檢測(cè)方法,根據(jù)已公布的蠟樣芽孢桿菌hblA基因序列設(shè)計(jì)內(nèi)外引物,并向反應(yīng)體系中加入熒光染料SYBRGreen Ⅰ,利用實(shí)時(shí)熒光監(jiān)測(cè)儀,建立實(shí)時(shí)熒光環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(real-timefluorescence loop-mediated isothermal amplification,RealAmp)檢測(cè)蠟樣芽孢桿菌的方法,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳和酶切鑒定。通過21 株致病菌驗(yàn)證RealAmp特異性,并比較了RealAmp與普通環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的敏感性,對(duì)人工污染的檢出限進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明對(duì)21 株致病菌進(jìn)行特異性實(shí)驗(yàn),4 株蠟樣芽胞桿菌呈陽性結(jié)果,17 株非蠟樣芽胞桿菌均呈陰性結(jié)果。RealAmp檢測(cè)純菌的靈敏度為8.2 CFU/mL,比普通環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的靈敏度高10 倍,人工污染牛乳RealAmp的檢出限為8.2 CFU/mL。并且在20 min左右即可判定結(jié)果。該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、操作便捷、可實(shí)時(shí)監(jiān)控檢測(cè)蠟樣芽孢桿菌,有望成為快速檢測(cè)蠟樣芽孢桿菌的有效方法。
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