短波紫外發(fā)光二極管(ultraviolet-C light-emitting diode,UVC-LED)處理是一種新型的非熱殺菌技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)以果汁中常見(jiàn)的致腐菌脂環(huán)酸芽孢桿菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)為目標(biāo)菌,研究UVC-LED對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的殺滅作用,通過(guò)測(cè)定處理后細(xì)菌胞內(nèi)核酸和蛋白質(zhì)泄漏量、細(xì)胞膜通透性、胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)的累積水平以及胞內(nèi)蛋白質(zhì)和DNA的損傷情況,進(jìn)一步探究UVC-LED對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的殺菌機(jī)理。結(jié)果表明:增加UVC-LED的照射劑量可增強(qiáng)其對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的殺滅效果,當(dāng)照射劑量增加至50 mJ/cm2時(shí),生理鹽水中存活的細(xì)菌數(shù)量降低4.6(lg(CFU/mL))。通過(guò)對(duì)存活曲線的模擬,發(fā)現(xiàn)UVC-LED對(duì)生理鹽水中脂環(huán)酸芽孢桿菌的殺滅作用既符合log-linear模型,又符合Weibull模型。處于不同生長(zhǎng)時(shí)期的細(xì)菌對(duì)UVC-LED的敏感度不同,其中處于對(duì)數(shù)期的細(xì)菌對(duì)UVC-LED更敏感。照射處理導(dǎo)致膜通透性的改變以及內(nèi)容物的泄漏,說(shuō)明細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)遭到一定程度的破壞,但是胞內(nèi)ROS的累積水平?jīng)]有顯著提高(P>0.05),拉曼光譜分析表明胞內(nèi)蛋白結(jié)構(gòu)有所改變,經(jīng)吖啶橙(acridine orange,AO)染色熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)照射處理后菌體DNA的結(jié)構(gòu)變化明顯。綜上,UVC-LED可通過(guò)造成DNA損傷、蛋白結(jié)構(gòu)變化和細(xì)胞膜透性改變從而殺滅脂環(huán)酸芽孢桿菌,根據(jù)破壞程度的不同,推測(cè)DNA損傷是細(xì)胞死亡的主要原因。
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