采用聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù),從2-酮基葡萄糖酸工業(yè)生產(chǎn)菌株變形假單胞菌JUIM01中克隆2-酮基葡萄糖酸 激酶的全長基因kguK,并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了重組菌株大腸桿菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kguK。在異丙基-β-D- 硫代半乳糖苷的誘導(dǎo)下,該重組菌株表達了一個特異的分子質(zhì)量約為36.0 ku融合蛋白,且該蛋白的Western-Blot鑒 定結(jié)果顯示為陽性。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,該蛋白是一種由305 個氨基酸殘基組成的親水性蛋白,定位于細胞 質(zhì)中,存在著與pfkB家族蛋白類似的保守結(jié)構(gòu)域,其二級結(jié)構(gòu)中α-螺旋、延伸鏈和無規(guī)則卷曲所占的比例分別為 35.73%、12.79%和51.48%。
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