目的:為市售核桃乳中核桃源及主要摻雜物種大豆兩種源性成分建立準(zhǔn)確、快速定量檢測(cè)方法。方法:從 植物組織(核桃、大豆)或是植物蛋白飲料(核桃乳飲料)提取核酸后,主要采用多重微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (polymerase chain reaction,PCR)技術(shù),測(cè)算單位質(zhì)量核桃和大豆的目的基因拷貝數(shù)比值,建立基因拷貝數(shù)與質(zhì) 量之間的關(guān)系,進(jìn)而利用該比例關(guān)系換算出植物蛋白飲料中核桃和大豆的投料量,以實(shí)現(xiàn)對(duì)植物蛋白飲料中植物源 性成分的定量檢測(cè)。結(jié)果:基于多重微滴式數(shù)字PCR定量檢測(cè)市售產(chǎn)品中大豆和核桃源性組分的方法,引物探針特 異性好,目標(biāo)物種間無交叉反應(yīng);靈敏度高,核桃中摻雜大豆的質(zhì)量檢測(cè)限為0.5%,相對(duì)誤差為5.6%。將單一源 性5 種不同質(zhì)量下靶基因拷貝數(shù)之比與5 種不同比例混合源性靶基因拷貝數(shù)之比通過重復(fù)3 次檢測(cè),綜合比較并擬 合后得到單位質(zhì)量下拷貝數(shù)(C大豆/C核桃=1.771 1)的換算比例值。在從商品超市中抽取的11 份不同品牌的核桃乳中 (僅含核桃一種植物源成分),多重微滴式數(shù)字PCR方法檢測(cè)顯示:11 份樣品均檢出核桃源性成分,6 份樣品檢出 大豆源性成分,其中4 份樣品中大豆與核桃質(zhì)量之比高于10%,判斷存在摻雜使假;2 份樣品大豆與核桃質(zhì)量之比 低于0.2%,極低的檢出量推斷為工藝沾染。結(jié)論:采用多重微滴式數(shù)字PCR準(zhǔn)確、快速的定量方法可作為鑒別核桃 乳中摻雜使假問題的有效手段。
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