尿石素A調(diào)控線粒體自噬及衰老信號(hào)通路拮抗糖尿病環(huán)境誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞異常
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目的:探究石榴活性產(chǎn)物尿石素A(urolithin A,UA)對(duì)糖尿病模擬環(huán)境下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)線粒體自噬及衰老的影響并初步探討信號(hào)機(jī)制。方法:分離、培養(yǎng)與鑒定C57小鼠BMSC,使用30 mmol/L葡萄糖和0.5 mmol/L棕櫚酸構(gòu)建細(xì)胞衰老模型,使用不同質(zhì)量濃度UA干預(yù),CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,β-半乳糖苷酶染色法檢測(cè)細(xì)胞衰老率,DCFH-DA和Mito SOX熒光探針檢測(cè)活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率,Western Blot檢測(cè)衰老和線粒體自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:提取的小鼠BMSC Sca-1、CD29陽(yáng)性表達(dá),CD45、CD11b陰性表達(dá),30 mmol/L葡萄糖+0.5 mmol/L棕櫚酸干預(yù)48 h為最佳造模條件,UA干預(yù)后細(xì)胞活力增加,細(xì)胞凋亡明顯減少,β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性細(xì)胞率減少,細(xì)胞及線粒體ROS熒光強(qiáng)度降低,張力蛋白同源物誘導(dǎo)的蛋白激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)、自噬受體蛋白P62表達(dá)顯著降低,Parkin E3泛素-蛋白連接酶(Parkin E3 ubiquitin protein ligase,PARKIN)、微管相關(guān)蛋白輕鏈3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)表達(dá)顯著升高,并呈劑量依賴性。細(xì)胞核中核因子-紅細(xì)胞2相關(guān)因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,NRF2)蛋白表達(dá)顯著降低,沉默信息調(diào)節(jié)因子1(sirtuin 1,SIRT1)、腫瘤蛋白53(tumor protein 53,P53)蛋白表達(dá)顯著升高,胞漿中NRF2蛋白表達(dá)顯著升高,SIRT1、P53蛋白表達(dá)顯著降低,并呈劑量依賴性。結(jié)論:UA抑制糖尿病高糖高脂環(huán)境引發(fā)的BMSC線粒體自噬障礙,減少BMSC衰老,其機(jī)制可能是通過(guò)激活PINK1/PARKIN線粒體自噬,并可能通過(guò)調(diào)控NRF2/SIRT1/P53衰老信號(hào)恢復(fù)干細(xì)胞質(zhì)量。
閱讀量: 33 發(fā)表時(shí)間: 2025-09-17